(Plūsmas citometrija, FCM) ir šūnu analizators, kas mēra iekrāsoto šūnu marķieru fluorescences intensitāti. Tā ir augsto tehnoloģiju tehnoloģija, kas izstrādāta, pamatojoties uz atsevišķu šūnu analīzi un šķirošanu. Tas var ātri izmērīt un klasificēt šūnu izmērus, iekšējo struktūru, DNS, RNS, proteīnus, antigēnus un citas fizikālās vai ķīmiskās īpašības, un to var balstīt uz šo klasifikāciju apkopojumu.
Plūsmas citometrs galvenokārt sastāv no šādām piecām daļām:
1 Plūsmas kamera un šķidruma sistēma
2 Lāzera gaismas avots un staru veidošanas sistēma
3 Optiskā sistēma
4 Elektronikas, uzglabāšanas, displeja un analīzes sistēma
5 Šūnu šķirošanas sistēma
Starp tiem lāzera ierosme lāzera gaismas avotā un staru veidošanās sistēmā ir galvenais fluorescences signālu mērījums plūsmas citometrijā. Uzbudinājuma gaismas intensitāte un ekspozīcijas laiks ir saistīti ar fluorescences signāla intensitāti. Lāzers ir saskaņots gaismas avots, kas var nodrošināt viena viļņa garuma, augstas intensitātes un augstas stabilitātes apgaismojumu. Tas ir ideāls ierosmes gaismas avots, lai atbilstu šīm prasībām.
Starp lāzera avotu un plūsmas kameru ir divas cilindriskas lēcas. Šīs lēcas fokusē lāzera staru ar apļveida šķērsgriezumu, ko izstaro no lāzera avota, elipsveida starā ar mazāku šķērsgriezumu (22 μm × 66 μm). Lāzera enerģija šajā eliptiskajā starā tiek sadalīta atbilstoši normālam sadalījumam, nodrošinot vienmērīgu apgaismojuma intensitāti šūnām, kas iet caur lāzera noteikšanas zonu. No otras puses, optiskā sistēma sastāv no vairākiem lēcu, caurumu un filtru komplektiem, kurus var aptuveni iedalīt divās grupās: plūsmas kameras augšpus un lejpus.
Optiskā sistēma plūsmas kameras priekšā sastāv no lēcas un cauruma. Lēcas un cauruma (parasti divas lēcas un adatas caurums) galvenā funkcija ir fokusēt lāzera staru ar apļveida šķērsgriezumu, ko izstaro lāzera avots, elipsveida starā ar mazāku šķērsgriezumu. Tas sadala lāzera enerģiju atbilstoši normālam sadalījumam, nodrošinot vienmērīgu apgaismojuma intensitāti šūnām visā lāzera noteikšanas zonā un samazinot izkliedētās gaismas radītos traucējumus.
Ir trīs galvenie filtru veidi:
1: garās caurlaides filtrs (LPF) — ļauj iziet cauri tikai gaismai, kuras viļņa garums pārsniedz noteiktu vērtību.
2: Īsās caurlaidības filtrs (SPF) — ļauj iziet cauri tikai gaismai, kuras viļņu garums ir zemāks par noteiktu vērtību.
3: Joslas caurlaides filtrs (BPF) — ļauj iziet cauri gaismai tikai noteiktā viļņa garuma diapazonā.
Dažādas filtru kombinācijas var novirzīt fluorescences signālus dažādos viļņu garumos uz atsevišķām fotopavairotāja lampām (PMT). Piemēram, filtri zaļās fluorescences (FITC) noteikšanai PMT priekšā ir LPF550 un BPF525. Oranžsarkanās fluorescences (PE) noteikšanai PMT priekšā izmantotie filtri ir LPF600 un BPF575. Filtri sarkanās fluorescences (CY5) noteikšanai PMT priekšā ir LPF650 un BPF675.
Plūsmas citometriju galvenokārt izmanto šūnu šķirošanai. Attīstoties datortehnoloģijām, attīstoties imunoloģijai un izgudrojot monoklonālo antivielu tehnoloģiju, tās pielietojums bioloģijā, medicīnā, farmācijā un citās jomās kļūst arvien plašāks. Šie lietojumi ietver šūnu dinamikas analīzi, šūnu apoptozi, šūnu tipizēšanu, audzēju diagnostiku, zāļu efektivitātes analīzi utt.
Izlikšanas laiks: 21. septembris 2023
