(Plūsmas citometrija, FCM) ir šūnu analizators, kas mēra iekrāsoto šūnu marķieru fluorescences intensitāti. Tā ir augsto tehnoloģiju tehnoloģija, kas izstrādāta, pamatojoties uz atsevišķu šūnu analīzi un šķirošanu. Tas var ātri izmērīt un klasificēt izmēru, iekšējo struktūru, DNS, RNS, olbaltumvielas, antigēnus un citas šūnu fizikālās vai ķīmiskās īpašības, un to var balstīt uz šo klasifikāciju savākšanu.
Plūsmas citometrs galvenokārt sastāv no šādām piecām daļām:
1 Plūsmas kamera un šķidruma sistēma
2 Lāzera gaismas avots un staru veidošanas sistēma
3 Optiskā sistēma
4 Elektronika, uzglabāšanas, displeja un analīzes sistēma
5 Šūnu šķirošanas sistēma
Starp tiem lāzera ierosme lāzera gaismas avotā un staru veidošanās sistēmā ir fluorescences signālu galvenais mērījums plūsmas citometrijā. Ierosmes gaismas intensitāte un iedarbības laiks ir saistīti ar fluorescences signāla intensitāti. Lāzers ir saskanīgs gaismas avots, kas var nodrošināt viena viļņa garumu, augstas intensitātes un augstas stabilitātes apgaismojumu. Tas ir ideāls ierosmes gaismas avots, lai izpildītu šīs prasības.
Starp lāzera avotu un plūsmas kameru ir divas cilindriskas lēcas. Šīs lēcas fokusē lāzera staru ar apļveida šķērsgriezumu, kas izstarots no lāzera avota eliptiskā starā ar mazāku šķērsgriezumu (22 μm × 66 μm). Lāzera enerģija šajā eliptiskajā starā tiek sadalīta atbilstoši normālam sadalījumam, nodrošinot konsekventu apgaismojuma intensitāti šūnām, kas šķērso lāzera noteikšanas zonu. No otras puses, optiskā sistēma sastāv no vairākiem objektīvu, pinhumu un filtru komplektiem, kurus var aptuveni sadalīt divās grupās: augšpus un lejpus plūsmas kameras.
Optiskā sistēma plūsmas kameras priekšā sastāv no objektīva un cauruma. Objektīva un cauruma (parasti divi objektīvi un caurumi) galvenā funkcija ir fokusēt lāzera staru ar apļveida šķērsgriezumu, ko lāzera avots izstaro eliptiskā starā ar mazāku šķērsgriezumu. Tas izplata lāzera enerģiju atbilstoši normālam sadalījumam, nodrošinot konsekventu šūnu apgaismojuma intensitāti visā lāzera noteikšanas apgabalā un samazinot traucējumus no klaiņojoša gaismas.
Ir trīs galvenie filtru veidi:
1: Garās caurlaides filtrs (LPF) - ļauj gaismu tikai ar viļņu garumu, kas ir augstāks par noteiktu vērtību, lai izietu cauri.
2: īsas caurlaides filtrs (SPF) - ļauj gaismu tikai ar viļņu garumu zem konkrētas vērtības, lai izietu cauri.
3: BandPass filtrs (BPF) - ļauj gaismai noteiktā viļņu garuma diapazonā iziet cauri.
Dažādas filtru kombinācijas var novirzīt fluorescences signālus dažādos viļņu garumos uz atsevišķām fotopārmultiplier caurulēm (PMTS). Piemēram, filtri zaļās fluorescences (FITC) noteikšanai PMT priekšā ir LPF550 un BPF525. Filtri, ko izmanto, lai noteiktu apelsīnu sarkano fluorescenci (PE) PMT priekšā, ir LPF600 un BPF575. Filtri sarkanās fluorescences noteikšanai (CY5) PMT priekšā ir LPF650 un BPF675.
Plūsmas citometriju galvenokārt izmanto šūnu šķirošanai. Ar datortehnoloģijas attīstību, imunoloģijas attīstību un monoklonālo antivielu tehnoloģijas izgudrojumu, tās pielietojums bioloģijā, medicīnā, aptiekā un citās jomās kļūst arvien izplatītāks. Šie pielietojumi ietver šūnu dinamikas analīzi, šūnu apoptozi, šūnu rakstīšanu, audzēja diagnozi, zāļu efektivitātes analīzi utt.
Pasta laiks: 21.-2023. Seps
