(Plūsmas citometrija, FCM) ir šūnu analizators, kas mēra iekrāsoto šūnu marķieru fluorescences intensitāti. Tā ir augsto tehnoloģiju tehnoloģija, kas izstrādāta, pamatojoties uz atsevišķu šūnu analīzi un šķirošanu. Tā var ātri izmērīt un klasificēt šūnu lielumu, iekšējo struktūru, DNS, RNS, olbaltumvielas, antigēnus un citas fizikālās vai ķīmiskās īpašības, un tās pamatā var būt šo klasifikāciju apkopojums.
Plūsmas citometrs galvenokārt sastāv no šādām piecām daļām:
1. Plūsmas kamera un fluidikas sistēma
2 Lāzera gaismas avots un staru kūļa veidošanas sistēma
3 Optiskā sistēma
4 Elektronika, uzglabāšana, attēlošana un analīzes sistēma
5 Šūnu šķirošanas sistēma
Starp tiem lāzera ierosme lāzera gaismas avotā un staru kūļa veidošanas sistēmā ir galvenais fluorescences signālu mērījums plūsmas citometrijā. Ierosmes gaismas intensitāte un ekspozīcijas laiks ir saistīti ar fluorescences signāla intensitāti. Lāzers ir koherents gaismas avots, kas var nodrošināt viena viļņa garuma, augstas intensitātes un augstas stabilitātes apgaismojumu. Tas ir ideāls ierosmes gaismas avots, lai izpildītu šīs prasības.
Starp lāzera avotu un plūsmas kameru atrodas divas cilindriskas lēcas. Šīs lēcas fokusē no lāzera avota izstaroto lāzera staru ar apļveida šķērsgriezumu elipsveida starā ar mazāku šķērsgriezumu (22 μm × 66 μm). Lāzera enerģija šajā eliptiskajā starā tiek sadalīta atbilstoši normālajam sadalījumam, nodrošinot vienmērīgu apgaismojuma intensitāti šūnām, kas iet caur lāzera noteikšanas zonu. No otras puses, optiskā sistēma sastāv no vairākiem lēcu, caurumiņu un filtru komplektiem, kurus var aptuveni iedalīt divās grupās: augšpus un lejpus plūsmas kameras.
Optiskā sistēma plūsmas kameras priekšpusē sastāv no lēcas un adatas cauruma. Lēcas un adatas cauruma (parasti divas lēcas un adatas caurums) galvenā funkcija ir fokusēt lāzera staru ar apļveida šķērsgriezumu, ko izstaro lāzera avots, elipsveida starā ar mazāku šķērsgriezumu. Tas sadala lāzera enerģiju atbilstoši normālam sadalījumam, nodrošinot vienmērīgu apgaismojuma intensitāti šūnām visā lāzera noteikšanas zonā un samazinot traucējumus no izkliedētas gaismas.
Ir trīs galvenie filtru veidi:
1: Garās caurlaidības filtrs (LPF) — laiž cauri tikai gaismu, kuras viļņa garums pārsniedz noteiktu vērtību.
2: Īscaurlaidības filtrs (SPF) — laiž cauri tikai gaismu ar viļņa garumu, kas ir zemāks par noteiktu vērtību.
3: Joslas caurlaides filtrs (BPF) — laiž cauri tikai gaismu noteiktā viļņu garuma diapazonā.
Dažādas filtru kombinācijas var novirzīt fluorescences signālus dažādos viļņu garumos uz atsevišķām fotoelektronu pavairotāju lampām (PMT). Piemēram, filtri zaļās fluorescences (FITC) noteikšanai PMT priekšā ir LPF550 un BPF525. Filtri, ko izmanto oranžsarkanās fluorescences (PE) noteikšanai PMT priekšā, ir LPF600 un BPF575. Filtri sarkanās fluorescences (CY5) noteikšanai PMT priekšā ir LPF650 un BPF675.
Plūsmas citometriju galvenokārt izmanto šūnu šķirošanai. Attīstoties datortehnoloģijām, imunoloģijai un monoklonālo antivielu tehnoloģijai, tās pielietojums bioloģijā, medicīnā, farmācijā un citās jomās kļūst arvien plašāks. Šie pielietojumi ietver šūnu dinamikas analīzi, šūnu apoptozi, šūnu tipizēšanu, audzēju diagnostiku, zāļu efektivitātes analīzi utt.
Publicēšanas laiks: 2023. gada 21. septembris
